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产品简介
ER-Tracker Green是一种具有细胞膜通透性的内质网(endoplasmic reticulum, ER)绿色荧光探针，对内质网具有高度选择性，可以用于活细胞内质网特异性荧光染色。ER-TrackerGreen对于细胞的毒性极低，而传统的DiOC6(3)对ER染色的同时也对细胞有一定的毒性。ER-Tracker Green的分子式为C37H42BClF2N6O6S，分子量为783.1。ER-Tracker Green呈绿色荧光，检测时最大激发光波长为504nm，最大发射光波长为511nm。Glibenclamide即glyburide，中文名称为格列本脲，是一种常用2型糖尿病的治疗药物，可以高度结合主要定位在内质网上的包含ATP敏感的钾离子通道(KATP channel)的磺脲类(sulphonylurea)受体。因此荧光标记的glibenclamide就可以用作内质网特异性的荧光探针。ER-Tracker Green适用于活细胞内质网的荧光染色，但不适合用于固定细胞内质网的荧光染色。本产品包装中提供了ER-Tracker Green稀释液，使ERTrackerGreen的使用更加便捷。 按照1:1000的比例稀释，每10ul可以配制10ml ER-Tracker Green工作液；按照1:3000的比例进行稀释，每10ul可以配制30ml ER-Tracker Green工作液。
使用方法：
1. ER-Tracker Green工作液的配制：
2. 取少量ER-Tracker Green按照1:1000的比例加入到ER-Tracker Green稀释液中。例如取1ul ER-Tracker Green加入到1ml ER-Tracker Green稀释液中。混匀后即为ER-Tracker Green工作液。
3. ER-Tracker Green工作液使用前需37 C预温育。
注：工作液中ER-Tracker Green的浓度可以根据实际情况进行适当调整，推荐的稀释比例调整范围为1:1000-1:3000。为降低背景，在染色效果可以接受的范围内，建议尽量使用较低浓度的ER-Tracker Green。
2. 内质网的荧光标记：
a. 去除细胞培养液，用适量的溶液如HBSS with Ca2+ & Mg2+(Hanks’ Balanced Salt Solution with Ca2+ & Mg2+)洗涤生长在盖
玻片上的细胞。对于悬浮细胞的染色可以参考贴壁细胞的染色方法进行。
b. 去除洗涤液，加入步骤1配制好的并37 C预温育的ER-TrackerGreen染色工作液，与细胞37 C共孵育15-30分钟。
c. 去除ER-Tracker Green染色工作液，用细胞培养液洗涤细胞1-2次。
d. 随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到内质网呈明亮的强荧光染色。
e. 如果经ER-Tracker Green染色后的细胞需要进行固定，可以使用4%甲醛37 ℃固定2分钟。固定后用适当的洗涤液洗涤2-3次，每次5分
钟，随后可以进行复染或滴加适当的抗荧光淬灭封片液，最后封片观察。注意：ER-Tracker Green染色的细胞不能用Triton X-100通透，Triton X-100通透处理会导致ER-Tracker Green的荧光染色消失。
注意事项
ER-Tracker Green (1mM)在4 C、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25 C水浴温育片刻至
全部融解后使用。对于微量的液体，每次使用前先离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。
• 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
• 格列本脲的药理学活性可能会影响内质网的一些功能；某些特殊细胞中磺脲类受体的可变表达可能会导致非内质网特异性染色。
• ER-Tracker Green适用于活细胞内质网的荧光染色，但不适合用于固定细胞内质网的荧光染色。如果经ER-Tracker Green染色后的细胞需要进行固定操作，使用4%多聚甲醛在37 C固定2分钟。
• ER-Tracker Green染色后的细胞不能用Triton X-100通透，TritonX-100通透处理会导致ER-Tracker Green的荧光染色消失。
• 需自备盖玻片和载玻片。
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题
为什么我看不到活细胞荧光指示剂信号有明显变化？
不管何种活细胞指示剂染料（如钙指示剂，pH指示剂，金属离子指示剂），请务必确保上样过程中无血清，否则血清会过早地切割带有AM酯基的染料并非特异性结合染料。在检测样品之前，请使用阳性对照优化染料浓度和染色时间来得到最佳的信号与背景比值。做阳性
对照时缓冲液一定要包含已知浓度的自由离子和用于打开离子通道的离子载体（例如Fluo-4 AM一类的钙指示剂，它包括缓冲液中加入钙与卡西霉素，又比如pH指示剂，不同pH值的缓冲液与尼日利亚霉素相结合）。类似于CellROX Green 或H2DCFDA需要一个细胞活性氧
（ROS）刺激作为阳性对照，例如甲萘醌。最后，确保成像系统具有灵敏的探测器。例如相对于显微镜或流式细胞仪，读板仪检测信号和背景差异的能力就比较低。
